澳洲胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基。它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。 因此,如何在使用過程中保護(hù)這些因子的活性,達(dá)到z大的細(xì)胞培養(yǎng)效果,就需要正確地使用胎牛血清。
正確地使用澳洲胎牛血清可分為以下四個方面:
1.正確儲存,避免反復(fù)凍融
1)血清在-20°C凍存。
2)血清避免反復(fù)凍融,以免降低因子活性。如一次用不完,應(yīng)進(jìn)行分裝。
3)血清和培養(yǎng)基應(yīng)盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”,配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。
4)血清避免在4°C或更高溫度靜置過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。
2. 正確的融化
目前市面上比較流行的【血清融化三步法】可更大限度地保存血清中因子的活性,不會產(chǎn)生沉淀,同時能縮短血清融化時間。
3. 關(guān)于胎牛血清的滅活
真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ]有形成有效補(bǔ)體,如果針對補(bǔ)體滅活的話,就不需要。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來決定。
4.胎牛血清的濃度
澳洲胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混合后配成*培養(yǎng)基。曾有文獻(xiàn)報道,不同的血清濃度對細(xì)胞存在一定的影響,尤其是干細(xì)胞和原代細(xì)胞。具體合適濃度需要用戶根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來確定,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費(fèi)。
值得一提的是,血清都是在認(rèn)證的廠房中生產(chǎn),經(jīng)過3次0.1μm過濾,出廠經(jīng)過檢測并且會使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測試及無菌檢測,污染幾率非常低。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性,根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測,結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買來的血清不需要再次進(jìn)行過濾。